1.日光型滤光片当使用人工光源时视野变黄色。染色标本的红染、黄染细节不易分辨。利用浅蓝色209号滤光片可把人工光源改变成近似自然光。普通显微镜所附的浅蓝色玻片就是属于此种滤光片。
2.绿色滤光片当观察标本上的红色细节时使用绿色滤光片可增加标本细节的反差即对比度。在黑白底片上进行显微照像时更为重要。因为一般全色胶片对蓝、绿光特别敏感,而对红光迟钝。苏木紫一伊红染色标本不加绿色滤光片时底片过于明亮。用绿色滤光片时标本细节的蓝色被吸收而显出很自然的物像。所以在进行黑白底片上的显微照像时,采自Livi滤光片系列中的211号通透曲线510-590nm滤光片为佳。
3.黄绿色滤光片吸收率较高的黄绿色滤光片对培养细胞之类反差低的未染标本的观察非常重要.
4.黄色滤光片Livi系列中的510nm的212号滤光片对活细胞的观察也是很好的。显微R像时反差过大,物像细节照不清时用黄色滤光片能够适宜地显示标本的蓝色细节。
5.蓝色滤光片Livi系列中的第209滤光片通透430-480nm,*好用于观察黄色、绿色受染标本及其显微照像。
6.吸热滤光片较早时期为防止红外线的热辐射损伤光具组而使用液体吸热滤光装置。现代大型显微镜的照明光源具组中装有可以摆进光路,也可摆出的吸热玻璃滤光片。
这些滤光片在条件困难的情况下可用液体滤光器替代,也可以自制.具体细节将在本章附录中介绍。
除了常规显微技术中应用滤光片外,在荧光显微镜技术中使用一些特殊滤光片。如宽频谱通透激发滤光片,高性能窄频谱激发滤光片,高性能宽频谱*强激发滤光片即干涉滤光片,阻挡滤光片,色光分离滤光片等。这些滤光片的吸收曲线和使用方法可在荧光显微镜专章中介绍。还有更特殊的1/2波长波晶片,1/4波长波晶片以及各种干涉片将在偏振光显微镜和干涉显微镜专章中讲述。
小型生物显微镜在使用中不存在安装和调试的问题。凡是出厂检验合格者均可投入使用。但是现代光学
仪器本身的性能愈来愈高级,结构愈来愈复杂,备件愈来愈多。因此从采购订货到投入使用,存在着许多技术问题。这类高档显微镜在使用过程中,根据不同目的,随时调换各种部件,并且随时调试其性能以期得到*佳效果。这就要求使用者具备基本的光学、机械学和电子控制的知识,以及显微镜技术包括染色技术的基础知识。在本章中只讲一般的*初步的知识。
显微镜的工作环境
现代大型光学显微镜都是用质地优良的光学器材、精密的机械装置和灵敏的电子控制仪器组装起来的高档设备.因此显微镜在运输、安装、使用过程中,防止损坏昂贵的光学具组和精密的机械结构,以及干挠电子控制功能。其工作环境也必须符合这些要求。
(一)工作室
实验室拥有较多的大型贵重显微镜时,可以集中于一套专设显微镜室。其余日常个人使用的小型显微镜可以分散在个人工作室中.光学显微镜室不能像电子显微镜室那样,要求高标准的防震、防潮和防尘设施.但总还要避开市内繁华交通招致的地面强展动为好.防潮措施对显微镜的光具组具有头等重要的意义。因为在潮湿环境中,光学玻璃表面可以生长每菌。它所分泌的盐酸之类腐蚀性物质适成光具组的不叫修复的顶伍。在MIR的厉间中,不常用的备用物镜、目镜、投影器具、聚光镜、棱镜等光具一律放入玻璃干燥器中保存。并且在干燥器中放入足量的吸潮剂。
显微镜室的地面不应蒸发水蒸气.墙壁可以涂沫油漆以防掉落粉尘。但是在这种房间中,应有足量的吸潮物质。我显微镜室的地面采用当地出产的木纹石研磨板,墙壁涂油.但它的外间的墙壁是白灰粉刷的墙。经长期测试证明,在我们北方气候条件下这样的白灰墙的吸潮容量足够大。
显微镜室的地面应覆盖地毯。因为在安装调试以及更换附件过程中难于避免脱手掉落贵重部件.如果脱手掉落一只复消色差物镜或棱镜、光栅、滤光镜,损失比起地毯要贵重得多。
显微镜室防尘的重要性不可忽视。尘埃中往往含有带电粒子.例如通辽地区辽河流域的黄尘使夜间行人衣物相磨擦,招致频发火花。这种尘埃进入电子显徽镜的电子枪中引起高压电短路,可以引起可怕的后果。虽然对于光学显微镜没有那么大的危险性,但粉尘足以造成成像光路的像散、畸变等等。灰尘过多可以形成傅里耶频谱变换(fourier spec-trum transform)效应.防尘措施并不是易事.在一般条件下显微镜室的窗户要严密,出入门扉应该是推拉屏风式的好一些。因为通常带折叶的门是扬起粉尘飞舞的重要原因。当用力关门时使整个房间的空气压缩,而用力拉门时从窗缝吸入粉尘。但也要经常通风,否则易生霉菌。
仪器附有精密电子计算机之类高档灵敏设备时,显微镜室要有空调机保持温度恒定。温度剧变对于光学器具、电子设备、精密机件都会产生不利的影响。
(二)安放位置
高档显微镜的安放位置*好选择不受直射阳光照射,距离墙壁稍有间隔的角落.附有灵敏电子装置的显微镜应安放在避开交流干挠的位置。带有灵敏的光电感应设备的仪器注意防止自然光的干挠。荧光显微镜观察、暗视野观察、偏振光观察、位相差观察都得避免非相关光线的挠射(暗室中*好,可避免非相关光的挠射)。
显微镜室之类的精密仪器室应与放置硫酸、盐酸、硝酸、洗液等强力挥发腐蚀物的房间隔开,不要有任何通道。
徕卡显微镜是一种精密的光学仪器,拥有150多年显微镜制造历史的德国徕卡显微系统公司生产的系列显微镜采用了多项现代“光、机、电”技术领域的先进科技技术。因此在正确使用的同时,做好显微镜的日常维护和保养,也是非常重要的一环。注重显微镜的良好维护和保养,可以延长显微镜的使用时间并确保显微镜能始终处于良好的工作状态中。
徕卡显微镜光学保养:
保持光学元件的清洁对于保证好的光学性能来说非常重要,当显微镜不用时,显微镜应当用仪器提供的防尘罩盖住。若光学表面及仪器有灰尘和污物,在擦清表面前应当先用吹气球吹去灰尘或用柔软毛刷去污物。
光学表面应当用无绒棉布,镜头纸或用专用的镜头清洁液沾湿的棉花签来清洁。清避免使用过多的溶剂,擦镜纸或棉花签应恰当沾湿溶剂但不要因为使用太多溶剂而渗透到物镜内,造成物镜清晰度下降及物镜损坏。
显微镜中目镜物镜的表面镜头zui容易受到灰尘和污物及油的粘污,当发现衬度,清晰度降低,雾状发生时,则需要用放大镜仔细检查目镜,物镜前面镜头的状况。
低倍物镜有相当大的前组镜片,能用缠在手指上的棉布或棉签及擦镜纸上用乙醇沾湿来擦拭。40X、100X需多加小心地用放大镜仔细检查。高倍镜中为了达到高的平坦度,应用了一个有小曲率半径凹面的前组镜头,在擦拭这组镜头时用带有棉球的牙签或棉花签清洁。擦拭镜头表面要轻。不要过度用力和有刮擦动作,并确信棉签触到镜头的凹面。在清理后用放大镜检查物镜是否损伤,如果必须要去开观察镜筒,小心不要接触到镜筒下面的外露镜头,镜头表面如有手指印会降低成像的清晰度,用清洁物目镜的方法进行擦拭。
当显微镜使用100X油镜使用完时,请及时将油镜表面擦拭清楚并检查40X物镜是否沾上油,如有请及时擦清。使显微镜始终保持成像清晰。