紫外分光光度计的选择,光度计性能特点

【导读】在选择各种仪器时，都有一定的标准，如测量精度、或者测量范围。而在选择紫外分光光度计时，我们考虑的是光学构造、光谱范围、样品类型和分析工具。 光学构造主

在选择各种仪器时，都有一定的标准，如测量精度、或者测量范围。而在选择紫外分光光度计时，我们考虑的是光学构造、光谱范围、样品类型和分析工具。

光学构造主要是指紫外分光光度计给出的光是单光束还是双光束。

单光束是通过单束光进行测量，在测量过程中给定波长，然后通过被测物和对照物得到吸光结果。而双光束是通过一个斩光轮将光束一分为二。

光源包括红外线、紫外线和可见光。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分(大约380 nm 到800 nm)。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。

分光光度计通常使用光电倍增管和光敏二极管来测量吸光值。

在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。

大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。

高性能的仪器，通常与PC机一起联用，需要从制造商提供额外的软件。同时用户也可以选择升级软件以满足他们的需要。

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紫外可见分光光度计在生命科学中的应用

　　目前,紫外可见分光光度计的应用主要是在定量分析方面。先从生命科学领域的应用来介绍。紫外可见分光光度计在生命科学中应用非常广泛。*主要的是以下5个方面。

　　1.蛋白质分析工作中

　　紫外可见分光光度计在蛋白质的分析中,*主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm,所以,采用光度测量模式,将仪器的波长GOTO到蛋白质的*大吸收峰波长280nm上,测试其吸光度大小,就可完成对蛋白质的定量检测。

　　2.核酸分析工作中

　　紫外可见分光光度计在核酸分析中的应用,主要是用来对核酸的定量检测;因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计的波长GOTO到核酸的*大吸收峰260nm上,测试其吸光度大小就是了。

　　3.氨基酸分析工作中

　　紫外可见分光光度计在氨基酸分析中的应用,主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到氨基酸的*大吸收峰230nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出氨基酸的含量。但是,因为氨基酸分析时,一般是将它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干扰吸收线,所以,在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时,要注意防止干扰的问题。此外,还需注意:只有少数氨基酸有紫外吸收,多数氨基酸无紫外吸收或很弱,测定时要衍生化后再测。

　　4.糖类分析测试工作中

　　紫外可见分光光度计在糖的分析中,主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm,所以,对糖类进行分析时,只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到氨基酸的*大吸收峰218nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出糖的含量。

　　5.多糖分析测试工作中

　　紫外可见分光光度计在多糖的分析中,主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO到多糖的*大吸收峰206nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出多糖的含量。

　　但是多糖的分析难度很大。因为,在206nm处的时候,光源(氘灯)的能量已经很弱,仪器光学系统的能量输出也很低,光电倍增管的灵敏度也很低,206nm左右的干扰也很大。所以,用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事,目前许多科学家正在研究中。