凝胶色谱柱长期放置须注意的细节有,色谱柱性能特点

【导读】凝胶色谱柱的应用也越来越广泛，使用过后也要对色谱柱进行保养，这样才能使它的使用寿命更长久，在遇到什么问题时需采取相应的措施。 凝胶色谱柱是以刚性的球型

凝胶色谱柱的应用也越来越广泛，使用过后也要对色谱柱进行保养，这样才能使它的使用寿命更长久，在遇到什么问题时需采取相应的措施。

凝胶色谱柱是以刚性的球型硅胶为基质，在其表面通过共价键化学键合亲水基团而成。凝胶色谱柱的填料具有高性能尺寸排阻色谱所必需的性能，即低吸附性和良好的孔径分布；其pH适用范围为2.5-7.5，可以使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。凝胶色谱柱适合用于分析分离蛋白质和多肽类样品。

凝胶色谱柱专为合成高分子的在高温下GPC分析而设计。尽管高度交联的PS/DVB 粒子广泛应用于合成高分子的分析，但是这种粒子会在有机溶剂中产生膨胀，尤其在高温下膨胀更为明显。凝胶色谱柱很好的解决了这个问题。填料以刚性硅胶为基质，经过独特的表面化学修饰，在高温和有机溶剂中可以保持极高的稳定性。此外相对于有机聚合物填料，HTP SEC填料的刚性结构减小了分离过程中的传质，从而取得更高的分辨率和分离效率。

凝胶色谱柱特点：

高柱容量、高分辨率

宽的pH范围 (pH范围2-8.5)

使用寿命长

低盐浓度洗脱，适合LC-MS分析

对于生物样品无强吸附

极低的非特异性吸附, 高的蛋白回收率及活性回收率

解决多维色谱分析应用

凝胶色谱柱的存放。如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点：

a.几天之内的短期放置，凝胶柱则用蒸馏水来冲洗，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。

b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。凝胶色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。

c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。

凝胶色谱柱是亲水、刚性、化学和机械性能很好的球性多孔高聚物。使用pH值范围是2-12，可以使用含有50%的混合有机溶剂为流动相。凝胶色谱柱因为有大的排阻极限和良好的校正曲线线性，所以适合分析多分散系如糖和人造水溶性聚合物。用于分离蛋白质、多肽、多糖、DNA、RNA、水溶性的有机聚合物和其他水溶性大分子样品等。

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色谱柱的老化步骤

　　色谱柱老化的目的：是彻底除去填充物中的残留溶剂和某些挥发性的物质；另一方面是促进固定液均匀牢固地分布在担体的表面上。而且新的气相色谱柱必须老化。　　装填好的色谱柱，连接于仪器上后，应先试压，试漏，而后在恒定的温度下用载气吹洗数小时后承受分析，一般称此为柱子的老化过程。老化的目的是把固定相的残存溶剂，低沸点杂质，低分子量固定液等赶走，使记录器基线平直，并在老化温度下使固定液在担体表面有一个再分布过程，从而涂得更加均匀牢固。装填好的色谱柱，经过老化一段时间后，柱效及性能均稳定了，这样才可使用。　　老化步骤：　　1、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关，输出压力稳定在0.4Mpa左右。　　2、打开色谱仪气体净化器的氮气开关，当色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后，打开色谱仪的电源开关。　　3、设置各工作部温度，柱箱初始温度50℃，)进样器和检测器都是250℃。　　4、待检测器温度升到100℃以上后，打开净化器上的氢气、空气开关，色谱仪的氢气稳定在0.1Mpa，空气压力为0.15Mpa左右，观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。　　5、显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间，待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮，进行色谱数据分析。分析结束时，点击“停止”按钮，数据即自动保存。　　6、首先关闭氢气和空气气源，使氢火焰检测器灭火。